INTRODUÇÃO A ESPECTROFOTOMETRIA

MARÍLIA ARAÚJO

Biomédica e essa é mais uma aula para a disciplina de biofísica e se faz necessária para que possamos compreender as aulas futuras de nefelometria e turbidimetria todos são métodos de análise onde a gente vai ter a interação entre a luz os espectros de luz e amostra a ser analisada o que a gente vai usar algo isso para aquela interaja com a matéria ou seja soluto

Que vai estar dentro dessa solução dentro dessa mostre e daí a gente vai saber se esse solo tú absorve luz transmite luz ou discípulos a partir daí eu consigo medir a concentração desses o luto nessa substância dando assim o resultado para essa pesquisa então a gente vai utilizar a emissão de uma luz branca que a gente vai chamar de espectro de emissão que seria

E é o princípio né a luz de princípio quando a luz branca ela passa pelo prisma ela vai ser decomposta em vários raios então a luz branca ela não é branca a gente a enxerga branca porém ela é composta por uma faixa de cores que vão do vermelho até o violeta oi e esse essa faixa de cores a chamada de espectro de emissão então essa luz branca vai ser projetada

Para a imagem ela vai entrar em contato com esse mar com perdão ela vai ser projetada para mostra vai entrar em contato com o solo tú dessa mostra e a gente vai conseguir é analisar a interação dessa mostra com essa luz se ela vai ser contida refletida propaganda dissipada calos é uma forma de radiação eletromagnética composta por fotos que são responsáveis por

Transmitir essa eletricidade que entraram em contato com o solo tu né dessa amostra e dar um resultado no final aplicação é a gente consegue entregar esse método onde a alisar capacidade derreteu de absorver de luz ou de transmitir luz das partículas contidas nessa mostra então eu tenho tipos de comprimento de ondas eletromagnéticas diferenciando os tipos de luz então

Cada comprimento de onda eu terei um tipo de luz e cada tipo de luz me dar a uma análise diferente será usada para o método diferente a espectrofotometria um método analítico baseado na interação da matéria com essa radiação eletromagnética que seria a luz calculando é o quanto é absorvido e o quanto é transmitido e o espectrofotômetro quando a como a gente

Já viu ele tem uma base de foco de luz com 7 cores visíveis onde é emitida luz né radiação eletromagnética resultando na concentração dessa mostra e resultando também na propagação retenção dessa luz que foi emitida a utilidade do espectrofotômetro é para a gente fazer medição de transmitância ou de absorver ou a de absorbância ou seja transmitância luz

Que foi transmitida e absorbância luz que foi absorvida nessa interação com o soluto presente na amostra então a transmitida tenho radiação de luz que foi transmitida da amostra então essa luz entrou em contato com a amostra e as partículas dessa amostra transmitiram essa luz na absorbância eu tenho uma radiação de luz que interagiu com a amostra e essa mostra a

Absor a luz então é se eu absorvi se me amostrar absorver essa luz eu vou ter uma transmitância pequena porque se ela absorveu ela não transmitiu esse eu tenho a transmitância grande então eu não tenho absorção grande elas são inversamente proporcionais as letras princípios da espectrofotometria é a absorção da luz por moléculas de espécie em uma solução

Então princípio do teste é no caso na absorção da luz o princípio do teste vai ser a interação da luz com as moléculas dispersa nessa solução das radiações eletromagnéticas que compõem a luz tem comprimento de onda diferentes como a gente já viu então o comprimento de onda entre 380 e 750 nanômetros são visíveis a olho humano já as radiações que

Possuem comprimentos de onda abaixo dos 380 nanômetros é a luz que a gente conhece como luz ultra-violeta nós já temos ainda a luz infravermelha que aí eu vou ter comprimento de onda acima de 750 nanometros e absorção né o a interação é dessa dessa luz com a matéria vai depender da natureza dessa solução ou seja dos componentes presentes nessa solução se

Os componentes tem essa afinidade maior com a luz ou essa concentração maior e pedindo que seja transmitido né barrando ali a luz para que ela não seja transmitida por leitor da amostras muito turva geralmente elas não transmitem e é muita luz porque essa luz vai ficar contida nessa morte não consegue passar para o leitor então geralmente a gente já sabe que essa

Será uma amostra é muito concentrada e aqui eu tenho um gráfico mostrando o comprimento de ondas ondas visíveis ao olho nu que vão de 380 a 417 150 a 780 nanômetros abaixo de 380 nanômetros e a gente encontra aí a luz ultra-violeta e acima de 750 nanômetros a luz infravermelha e na prática laboratorial quando a gente utiliza esse método de espectrofotometria

A gente segue a lei de lambert-beer que diz que é a absorbância é diretamente proporcional a concentração do soluto então se eu tenho uma mostra muito concentrada eu terei pouco a transmissão e mais absorção essa forma é uma fórmula a empregada na lei de la mente be mas a gente não utiliza porque ela é todo esse processo é cm automatizado então o leitor de

Espectrofotômetro já diz a gente quanto foi essa leitura e os componentes do espectrofotômetro então eu tenho um aparelho que faz essa análise para mim chamado de espectofotometro não devo ter emissão de luz um leite produto lado e as cubetas onde vão ficar me amostra e onde vai ficar uma solução padrão para a gente poder calibrar esse aparelho então eu tenho

Uma fonte de luz composta por uma lâmpada de deutério que uma lâmpada eu ver e uma lâmpada de tungstênio para lâmpada visível a olho nu tem o colimador que é uma lente de transporte e de direcionamento dessa luz para minha mostra tem um monocromador que é um prisma um dispositivo eletrônico que transforma a luz nos comprimentos de onda necessário para que

Interaja com a amostra nós temos a cubeta que é um recipiente onde vai ficar à mostra ela geralmente é feita de cristal temos o detector onde é o que vai medir a radiação de luz que foi transmitida então final foi absorvido foi transmitido o que foi absorvido será terá pouca transmissão como eu como eu falei no começo ela é inversamente proporcional quando

Eu tenho uma transmissão grande eu não tenho absorção e quando eu tenho absorção eu não tenho uma transmissão grande e aqui temos o processo do aparelho do espectrofotômetro com emissão de luz humano flamador o que vai selecionar né o comprimento de ondas nós temos o detector onde vai me dizer o que conseguiu passar por essa mostra né a transmitância dessa

Amostra ea partir dela eu consigo saber o que foi absorvido a pessoa as cubetas e eu tenho amostras de intensidades diferentes amostra de concentrações diferentes aqui é um aparelho e espectrofotômetro dentro desse aparelho quando a luz é emitida ela passa assim através da amostra e vai para o leitor então a partir do que chegam ao leitor a gente sabe se essa mostra

Tá muito concentrada ela não deixa a luz passar né ou é essas moléculas absolveram os por isso que ela não conseguiu passar esse ela é uma mostra menos concentrada dependendo da composição dela ela vai ter uma transmitância maior né vai chegar mais luz do outro lado e aqui eu tenho exemplos no caso aqui a gente vai ver nas próximas aulas e vocês vão entender a

Turbidimetria nephelometry assim ó a turbidimetria é a luz que foi transmitida e a nefelometria são luzes que foram dissipadas então entraram em contato com a matéria e seguiram em outros cursos ela foi dissipada a absorção é proporcionar a concentração da amostra é como eu falei se eu tenho amostra muito concentrada provavelmente eu terei a absorção maior dessa

Luz e e aqui a gente tem uma análise de glicemia na análise da glicose através do processo espectofotometria o aparelho de espectrofotometria é muito utilizado para dosagens bioquímicas em laboratórios de médio e pequeno porte que não tem toda aparelhagem para uma análise automatizada então a gente utiliza o espectrofotômetro para isso é um aparelho de custo

Bem menor então eu sigo o procedimento básico dos kits né onde eu vou fazer o branco e teste padrão eu vou fazer é homogenizar a incubar essa mosta eu vou fazer a mistura homogênea usar em cuba 37 graus celsius por 10 minutos vou zerar o aparelho com branco quando eu passo branco ela é uma mostra neutra que vai ser essa aparelho para que toda medida que seja daqui

Para frente seja o conde gente tá mostra que não tem interferências resíduos de outras análises então eu vou usar a com o branco vou determinar a absorção do teste e do padrão entre para que ele ficou reto tem que estar entre 490 e 520 e essa solução ela fica estável até 30 minutos então eu vou ter que analisar e isso até esse prazo então a gente colocou no

Aparelho de espectrofotometria na cubeta amostra e na própria bula do teste de glicemia eu vou ter o cálculo para a gente fazer através da espectrofotometria da absorbância desse teste é pela absorbância do padrão x 100 eu terei aí em análise então a gente vai colocar essa mostra no aparelho absorvância e vai ser medida o aparelho já vai me dar essa absorção

Como é que ele sabe me da absorção pelo que ele leu na transmissão então se eu lhe ensinar a transmissão foi pouca então eu terei uma absorção maior se a minha transmissão foi muita eu terei um absorção menor consequentemente uma amostra menos concentrada com menos partículas de glicose no caso aí a gente fez a leitura da absorbância do teste que deu 0,372

No aparelho do espectrofotômetro a gente fez a absorvância do padrão antes de tudo isso foi zerado com branco então a gente faz o cálculo e a gente tem a medida final e miligramas por decilitro da glicemia e também é utilizada para outros outras análises dentro da bioquímica do sai as transaminases te gerou e tgp ureia glicose triglicerídeos hemoglobina porém

Para amostras muito turvas o espectrofotômetro não vai dar uma leitura muito precisa e a gente vai ter que se adequar na bula dos kits na e dos reagentes que eu tô utilizando para determine para cada tipo de análise que eu tô fazendo voltei ali um comprimento de ondas que eu vou ter que calibrar esse aparelho nesse comprimento de ondas ajustar ele para cada análise

Que eu for realizar mas todas essas informações vão estar contidas na bula dos nossos reagentes para fazer essas análises são basicamente é a espectrofotometria é análise da interação a gente tem uma e mostra a partir da interação de espectro de luz a partir dessa interação da luz emitida pelo aparelho que vai interagir com essa amostra e daí vai me dizer a

Concentração dessa amostra no caso se eu tenho amostra muito concentrada por concentrada no final vai me dizer é a partir dessa interação com a luz e a matéria vai me dizer uma dosagem é muito obrigado a todos e seguimos para as aulas de nefelometria e turbidimetria e

Transcrito do video
INTRODUÇÃO A ESPECTROFOTOMETRIA By ETR CARUARU

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